）传感平台，用于无指示剂的均相生物分析。该平台通过导电性生物传感技术与报告系统的结合，实现了在无需外源电活性指示剂的情况下进行目标检测。研究以

　　BPCL-2，结合光电倍增管（PMT）操作电压为-800V，用于测量ECL发光强度。

　　ITO玻璃板的准备：从供应商处采购电阻小于6Ω/平方的ITO玻璃板，并在其上制作导电BPE，确保传感池包含BPE的阴极和驱动电位的阳极，而报告池包含BPE的阳极和驱动电位的阴极。

　　电沉积金：为了提高导电性，分别在BPE的阴极和驱动电位的阴极上进行金电沉积。

　　反应混合：在超纯水中混合探针DNA、H1和H2，浓度分别为0.5μM、5μM和5μM。

　　目标miRNA-21的添加：将不同浓度的miRNA-21加入混合物中，37°C孵育2小时以进行HCR反应。

　　电泳条件：在TBE缓冲液（1×）中，恒定电压80V，室温下进行2小时电泳。

　　成像分析：使用生物分子成像仪拍摄凝胶，以验证探针DNA、H1和H2的杂交情况。

　　ECL测量：使用循环伏安法，电位范围为1.0-4.5V，扫描速率为100 mV/s，进行ECL测量。每个样品测量三次，计算标准偏差。

　　PAGE分析（图1A）：短核酸（探针、H1、H2）在低分子量位置显示荧光带，而miRNA-21诱导的核酸聚合物在高分子量位置显示。这验证了目标miRNA-21触发了探针、H1和H2的杂交反应。

　　导电性测量（图1B）：混合短核酸后溶液的导电性显著增加，而加入miRNA-21后，导电性显著下降。这表明生成的长核酸聚合物导电性较差。

　　ECL测量（图1C）：ECL强度在短核酸（22 bp）溶液中显著高于长核酸（1250 bp），进一步验证了导电性对BPE-ECL系统的重要影响。

　　ECL响应的验证（图1D）：相较于无miRNA-21存在的情况（曲线g），miRNA-21存在时ECL响应显著降低（曲线h），因为miRNA-21诱导的HCR生成了导电性较差的核酸聚合物。

　　探针浓度（图2A）：ECL强度差值（ΔECL）随着探针浓度的增加而增加，在浓度超过0.5μM后达到平台期。因此，选用0.5μM作为最佳探针浓度。

　　H1/H2浓度（图2B）：随着H1/H2浓度的增加，ΔECL响应持续增强，在5μM时达到饱和，表明5μM为最佳H1/H2浓度。

　　温度（图2C）：ΔECL响应随着温度升高至37°C后增加，随后略有下降，表明最佳反应温度为37°C。

　　反应时间（图2D）：ΔECL响应随HCR反应时间的延长而增加，在120分钟后达到最大，选择120分钟作为最佳反应时间。

　　miRNA-155）的检测结果表明，BPE-ECL传感系统对miRNA-21具有良好的特异性。(3).稳定性和重复性（图4B, 4C）：ECL信号在八次重复测量中稳定，RSD

　　2.56%，三种不同浓度miRNA-21的RSD分别为3.2%、2.4%和1.4%，表明系统具有良好的稳定性和重复性。(4).实际应用（图4D）：检测不同数量MCF-7细胞裂解液中的miRNA-21

　　ECL信号随细胞数量增加而下降，验证了该传感平台在临床样品检测中的应用潜力。图4. (A)不同miRNA类似物的ECL

　　反应生成长链核酸聚合物，导致传感池导电性降低，进而减少报告池的ECL信号输出。该平台具备传统BPE-ECL传感器的优点，通过物理分离传感和报告反应有效避免了干扰，且无需外源电活性指示剂。该方案简单、灵敏、快速，并在实际样品检测中表现出良好的应用前景。未来，该方案有望进一步应用于包括DNA、小分子、蛋白质、细胞和细菌等多种目标的定量和定性检测。*因学识有限，难免有所疏漏和谬误，恳请批评指正*

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